3.2.2 受試物為保健食品原料時(shí)，應提供動(dòng)物和植物類(lèi)原料的產(chǎn)地和食用部位、微生物類(lèi)原料的分類(lèi)學(xué)地位和生物學(xué)特征、食用條件和方式、食用歷史、食用人群等基本信息，以及其他有助于開(kāi)展安全性評估的相關(guān)資料。

3.2.3 原料為從動(dòng)物、植物、微生物中分離的成分時(shí)，還需提供該成分的含量、理化特性和化學(xué)結構等資料。

3.2.4 提供受試物的主要成分、功效成分/標志性成分及可能含有的有害成分的分析報告。

3.3 受試物的特殊要求

3.3.1 保健食品應提供包裝完整的定型產(chǎn)品。毒理學(xué)試驗所用樣品批號應與功能學(xué)試驗所用樣品批號一致，并且為衛生學(xué)試驗所用三批樣品之一（益生菌、奶制品等產(chǎn)品保質(zhì)期短于整個(gè)試驗周期的產(chǎn)品除外）。根據技術(shù)審評意見(jiàn)要求補做試驗的，若原批號樣品已過(guò)保質(zhì)期，可使用新批號的樣品開(kāi)展試驗，但應提供新批號樣品按產(chǎn)品技術(shù)要求檢驗的全項目檢驗報告。

3.3.2 由于推薦量較大等原因不適合直接以定型產(chǎn)品進(jìn)行試驗時(shí)，可以對送檢樣品適當處理，如濃縮等。為滿(mǎn)足安全倍數要求，可去除部分至全部輔料，如去除輔料后仍未達到安全倍數要求，可部分去除已知安全的食品成分等。應提供受試樣品處理過(guò)程的說(shuō)明和相應的證明文件，處理過(guò)程應與原保健食品的主要生產(chǎn)工藝步驟保持一致。

4 毒理學(xué)試驗的主要項目

依據食品安全國家標準GB 15193的相關(guān)評價(jià)程序和方法開(kāi)展下列試驗。

4.1 急性經(jīng)口毒性試驗

4.2 遺傳毒性試驗：細菌回復突變試驗，哺乳動(dòng)物紅細胞微核試驗，哺乳動(dòng)物骨髓細胞染色體畸變試驗，小鼠精原細胞或精母細胞染色體畸變試驗，體外哺乳類(lèi)細胞HGPRT基因突變試驗，體外哺乳類(lèi)細胞TK基因突變試驗，體外哺乳類(lèi)細胞染色體畸變試驗，嚙齒類(lèi)動(dòng)物顯性致死試驗，體外哺乳類(lèi)細胞DNA損傷修復（非程序性DNA合成）試驗，果蠅伴性隱性致死試驗。

遺傳毒性試驗組合：一般應遵循原核細胞與真核細胞、體內試驗與體外試驗相結合的原則，并包括不同的終點(diǎn)（誘導基因突變、染色體結構和數量變化），推薦下列遺傳毒性試驗組合：

組合一：細菌回復突變試驗；哺乳動(dòng)物紅細胞微核試驗或哺乳動(dòng)物骨髓細胞染色體畸變試驗；小鼠精原細胞或精母細胞染色體畸變試驗或嚙齒類(lèi)動(dòng)物顯性致死試驗。

組合二：細菌回復突變試驗；哺乳動(dòng)物紅細胞微核試驗或哺乳動(dòng)物骨髓細胞染色體畸變試驗；體外哺乳類(lèi)細胞染色體畸變試驗或體外哺乳類(lèi)細胞TK基因突變試驗。

根據受試物的特點(diǎn)也可用其他體外或體內測試替代推薦組合中的一個(gè)或多個(gè)體外或體內測試。

4.328天經(jīng)口毒性試驗

4.4致畸試驗

4.590天經(jīng)口毒性試驗

4.6 生殖毒性試驗

4.7 毒物動(dòng)力學(xué)試驗

4.8 慢性毒性試驗

4.9 致癌試驗

4.10慢性毒性和致癌合并試驗

5毒性試驗的選擇

5.1 保健食品原料

需要開(kāi)展安全性毒理學(xué)檢驗與評價(jià)的保健食品原料，其試驗的選擇應參照新食品原料毒理學(xué)評價(jià)有關(guān)要求進(jìn)行。

5.2保健食品

5.2.1 保健食品一般應進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗、三項遺傳毒性試驗和28天經(jīng)口毒性試驗。根據實(shí)驗結果和目標人群決定是否增加90天經(jīng)口毒性試驗、致畸試驗和生殖毒性試驗、慢性毒性和致癌試驗及毒物動(dòng)力學(xué)試驗。

5.2.2 以普通食品為原料，僅采用物理粉碎或水提等傳統工藝生產(chǎn)、食用方法與傳統食用方法相同，且原料推薦食用量為常規用量或符合國家相關(guān)食品用量規定的保健食品，原則上可不開(kāi)展毒性試驗。

5.2.3 采用導致物質(zhì)基礎發(fā)生重大改變等非傳統工藝生產(chǎn)的保健食品，應進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗、三項遺傳毒性試驗、90天經(jīng)口毒性試驗和致畸試驗，必要時(shí)開(kāi)展其他毒性試驗。

6特定產(chǎn)品的毒理學(xué)設計要求

6.1 針對產(chǎn)品配方中含有人體必需營(yíng)養素或已知存在安全問(wèn)題的物質(zhì)的產(chǎn)品，如某一過(guò)量攝入易產(chǎn)生安全性問(wèn)題的人體必需營(yíng)養素（如維生素A、硒等）或已知存在安全問(wèn)題物質(zhì)（如咖啡因等），在按其推薦量設計試驗劑量時(shí)，如該物質(zhì)的劑量達到已知的毒性作用劑量，在原有劑量設計的基礎上，應考慮增設去除該物質(zhì)或降低該物質(zhì)劑量（如降至未觀(guān)察到有害作用劑量）的受試物劑量組，以便對受試物中其他成分的毒性作用及該物質(zhì)與其他成分的聯(lián)合毒性作用做出評價(jià)。

6.2 推薦量較大的含乙醇的受試物，在按其推薦量設計試驗劑量時(shí)，如超過(guò)動(dòng)物最大灌胃容量，可以進(jìn)行濃縮。乙醇濃度低于15％（V/V）的受試物，濃縮后應將乙醇恢復至受試物定型產(chǎn)品原來(lái)的濃度。乙醇濃度高于15％的受試物，濃縮后應將乙醇濃度調整至15％，并將各劑量組的乙醇濃度調整一致。不需要濃縮的受試物，其乙醇濃度高于15％時(shí)，應將各劑量組的乙醇濃度調整至15％。在調整受試物的乙醇濃度時(shí)，原則上應使用生產(chǎn)該受試物的酒基。

6.3 針對適宜人群包括孕婦、乳母或兒童的產(chǎn)品，應特別關(guān)注是否存在生殖毒性和發(fā)育毒性，必要時(shí)還需檢測某些神經(jīng)毒性和免疫毒性指標。

6.4有特殊規定的保健食品，應按相關(guān)規定增加相應的試驗，如含有益生菌、真菌等，應當按照《保健食品原料用菌種安全性檢驗與評價(jià)技術(shù)指導原則》開(kāi)展相關(guān)試驗。

7 動(dòng)物實(shí)驗設計共性問(wèn)題

7.1 受試物的前處理

7.1.1袋泡茶類(lèi)受試物的提取方法應與產(chǎn)品推薦飲用的方法相同，可用該受試物的水提取物進(jìn)行試驗。如果產(chǎn)品無(wú)特殊推薦飲用方法，水提取物可采用以下提取條件進(jìn)行：常壓、溫度80℃～90℃，浸泡時(shí)間30 min，水量為受試物質(zhì)量的10倍或以上，提取2次，將提取液合并濃縮至所需濃度，并標明該濃縮液與原料的比例關(guān)系。如產(chǎn)品有特殊推薦服用方法（如推薦食用浸泡后的產(chǎn)品），在毒理學(xué)試驗設計時(shí)應予以考慮。

7.1.2液體受試物需要進(jìn)行濃縮處理時(shí)，應采用不破壞其中有效成分的方法?？墒褂脺囟?0℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)濃縮、冷凍干燥等方法。液體受試物經(jīng)濃縮后達到人體推薦量的試驗要求，如不能通過(guò)灌胃給予的，容許以摻入飼料的方式給予實(shí)驗動(dòng)物。

7.1.3 不易粉碎的固體受試物（如蜜餞類(lèi)和含膠基的受試物）可采用冷凍干燥后粉碎的方式處理，并在試驗報告中詳細說(shuō)明。

7.1.4 含益生菌或其他微生物的受試物在進(jìn)行細菌回復突變試驗或體外細胞試驗時(shí)，應將微生物滅活，并說(shuō)明具體方法。

7.1.5 對人體推薦量較大的受試物，在按其推薦量設計試驗劑量時(shí)，如超過(guò)動(dòng)物的最大灌胃容量或超過(guò)摻入飼料中的限量（10％（w/w）），可允許去除無(wú)安全問(wèn)題的部分至全部輔料或已知安全的食品成分進(jìn)行試驗，并在試驗報告中詳細說(shuō)明。

7.1.6 吸水膨脹率較高的受試物應考慮受試物吸水膨脹后對給予劑量和實(shí)驗動(dòng)物的影響，應選擇合適的受試物給予方式（灌胃或摻入飼料）。如采用灌胃方式給予，應選擇水為溶媒。

7.2 受試物的給予方式

7.2.1 受試物應經(jīng)口給予。根據受試物的性質(zhì)及人體推薦攝入量，選擇摻入飼料或飲水、灌胃的方式給予受試物。應詳細說(shuō)明受試物配制方法、給予方法和時(shí)間。

7.2.2 灌胃給予受試物時(shí)，應根據試驗的特點(diǎn)和受試物的理化性質(zhì)選擇適合的溶媒（溶劑、助懸劑或乳化劑），將受試物溶解或懸浮于溶媒中。溶媒一般可選用蒸餾水、純凈水、食用植物油、食用淀粉、明膠、羧甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯等，如使用其他溶媒應說(shuō)明理由。所選用的溶媒本身應不產(chǎn)生毒性作用；與受試物各成分之間不發(fā)生化學(xué)反應，且保持其穩定性；無(wú)特殊刺激性或氣味。

7.2.3摻入飼料或飲水方式給予受試物時(shí)，應保證受試物的穩定性、均一性及適口性，以不影響動(dòng)物攝食、飲水量和營(yíng)養均衡為原則。當受試物在飼料中的加入量超過(guò)5％（w/w）時(shí)，需考慮動(dòng)物的營(yíng)養需要，結合受試物的蛋白質(zhì)含量將各組飼料蛋白質(zhì)水平調整一致，并說(shuō)明具體調整方法。飼料中添加受試物的比例最高不超過(guò)10％（w/w）。

7.3 實(shí)驗動(dòng)物的選擇

實(shí)驗動(dòng)物應符合相應國家標準的要求，同時(shí)結合保健功能（如輔助改善記憶、緩解體力疲勞等）的特點(diǎn)選擇適當的實(shí)驗動(dòng)物的品系、性別和年齡等。

8 試驗結果的判定與應用

8.1 急性毒性試驗

8.1.1 原料

如LD50小于人的推薦（可能）攝入量的100倍，則一般應放棄該受試物作為保健食品原料，不再繼續進(jìn)行其他毒理學(xué)試驗。

8.1.2 保健食品

8.1.2.1 如LD50小于人的可能攝入量的100倍，則放棄該受試物作為保健食品。如LD50大于或等于100倍者，則可考慮進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗。

8.1.2.2 如動(dòng)物未出現死亡的劑量大于或等于10g/kg·BW（涵蓋人體推薦量的100倍），則可進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗。

8.1.2.3 對人的可能攝入量較大和其它一些特殊原料的保健食品，按最大耐受量法給予最大劑量動(dòng)物未出現死亡，也可進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗。

8.2 遺傳毒性試驗

8.2.1 如三項試驗均為陰性，則可繼續進(jìn)行下一步的毒性試驗。

8.2.2 如遺傳毒性試驗組合中兩項或以上試驗陽(yáng)性，則表示該受試物很可能具有遺傳毒性和致癌作用，一般應放棄該受試物應用于保健食品。

8.2.3如遺傳毒性試驗組合中一項試驗為陽(yáng)性，根據其遺傳毒性終點(diǎn)、結合受試物的結構分析、化學(xué)反應性、生物利用度、代謝動(dòng)力學(xué)、靶器官等資料綜合分析，再選兩項備選試驗（至少一項為體內試驗）。如再選的試驗均為陰性，則可繼續進(jìn)行下一步的毒性試驗；如其中有一項試驗陽(yáng)性，則應放棄該受試物應用于保健食品。

8.328天經(jīng)口毒性試驗

對只需要進(jìn)行急性毒性、遺傳毒性和28天經(jīng)口毒性試驗的受試物，若試驗未發(fā)現有明顯毒性作用，綜合其他各項試驗結果可做出初步評價(jià)；若試驗發(fā)現有明顯毒性作用，尤其是存在劑量-反應關(guān)系時(shí)，應放棄該受試物用于保健食品。

8.490天經(jīng)口毒性試驗

根據試驗所得的未觀(guān)察到有害作用劑量進(jìn)行評價(jià)，原則是：

a)未觀(guān)察到有害作用劑量小于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表示毒性較強，應放棄該受試物用于保健食品。

b)未觀(guān)察到有害作用劑量大于100倍而小于300倍者，應進(jìn)行慢性毒性試驗。

c)未觀(guān)察到有害作用劑量大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性毒性試驗，可進(jìn)行安全性評價(jià)。

8.5 致畸試驗

根據試驗結果評價(jià)受試物是否為該實(shí)驗動(dòng)物的致畸物。若致畸試驗結果陽(yáng)性則不再繼續進(jìn)行生殖毒性試驗和生殖發(fā)育毒性試驗。在致畸試驗中觀(guān)察到的其他發(fā)育毒性，應結合28天和（或）90天經(jīng)口毒性試驗結果進(jìn)行評價(jià)，必要時(shí)進(jìn)行生殖毒性試驗和生殖發(fā)育毒性試驗。

8.6 生殖毒性試驗和生殖發(fā)育毒性試驗

根據試驗所得的未觀(guān)察到有害作用劑量進(jìn)行評價(jià)，原則是：

a)未觀(guān)察到有害作用劑量小于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表示毒性較強，應放棄該受試物用于保健食品。

b)未觀(guān)察到有害作用劑量大于100倍而小于300倍者，應進(jìn)行慢性毒性試驗。

c)未觀(guān)察到有害作用劑量大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性毒性試驗，可進(jìn)行安全性評價(jià)。

8.7 慢性毒性和致癌試驗

8.7.1 根據慢性毒性試驗所得的未觀(guān)察到有害作用劑量進(jìn)行評價(jià)的原則是：

a)未觀(guān)察到有害作用劑量小于或等于人的推薦（可能）攝入量的50倍者，表示毒性較強，應放棄該受試物用于保健食品。

b)未觀(guān)察到有害作用劑量大于50倍而小于100倍者，經(jīng)安全性評價(jià)后，決定該受試物可否用于保健食品。

c)未觀(guān)察到有害作用劑量大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于保健食品。

8.7.2 根據致癌試驗所得的腫瘤發(fā)生率、潛伏期和多發(fā)性等進(jìn)行致癌試驗結果判定的原則是（凡符合下列情況之一，可認為致癌試驗結果陽(yáng)性。若存在劑量-反應關(guān)系，則判斷陽(yáng)性更可靠）：

a)腫瘤只發(fā)生在試驗組動(dòng)物，對照組中無(wú)腫瘤發(fā)生。

b)試驗組與對照組動(dòng)物均發(fā)生腫瘤，但試驗組發(fā)生率高。

c)試驗組動(dòng)物中多發(fā)性腫瘤明顯，對照組中無(wú)多發(fā)性腫瘤，或只是少數動(dòng)物有多發(fā)性腫瘤。

d)試驗組與對照組動(dòng)物腫瘤發(fā)生率雖無(wú)明顯差異，但試驗組中發(fā)生時(shí)間較早。

致癌試驗結果陽(yáng)性應放棄將該受試物用于保健食品。

9 安全性綜合評價(jià)時(shí)需要考慮的因素

9.1試驗指標的統計學(xué)意義、生物學(xué)意義和毒理學(xué)意義

對實(shí)驗中某些指標的異常改變，應根據試驗組與對照組指標是否有統計學(xué)差異、是否存在劑量-反應關(guān)系、同類(lèi)指標結果的一致性、不同性別結果的一致性、與受試物聲稱(chēng)的保健功能的關(guān)聯(lián)以及本實(shí)驗室的歷史性對照值范圍等，綜合考慮指標差異有無(wú)生物學(xué)意義，并進(jìn)一步判斷是否具有毒理學(xué)意義。此外，如在受試物組發(fā)現某種在對照組沒(méi)有發(fā)生的腫瘤，即使與對照組比較無(wú)統計學(xué)意義，仍要給予關(guān)注。

9.2 人體推薦（可能）攝入量較大的受試物

一方面，若受試物摻入飼料的最大加入量（原則上最高不超過(guò)飼料的10％）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達不到未觀(guān)察到有害作用劑量為人體推薦（可能）攝入量的規定倍數時(shí)，綜合其他毒性試驗結果和實(shí)際人體食用或飲用量進(jìn)行安全性評價(jià)。另一方面，應考慮給予受試物量過(guò)大時(shí)，可能通過(guò)影響營(yíng)養素攝入量及其生物利用率，從而導致某些與受試物無(wú)關(guān)的毒理學(xué)表現。

9.3 時(shí)間-毒性效應關(guān)系

對由受試物引起實(shí)驗動(dòng)物的毒性效應進(jìn)行分析評價(jià)時(shí)，要考慮在同一劑量水平下毒性效應隨時(shí)間的變化情況。

9.4 人群資料

由于存在著(zhù)動(dòng)物與人之間的物種差異，在評價(jià)保健食品及其原料的安全性時(shí)，應盡可能收集人群接觸受試物后的反應資料。人體的毒物動(dòng)力學(xué)或代謝資料對于將動(dòng)物試驗結果推論到人體具有很重要的參考意義。

9.5動(dòng)物毒性試驗和體外試驗資料

本程序所列的各項動(dòng)物毒性試驗和體外試驗系統是根據目前管理（法規）毒理學(xué)規定所得到的重要資料，也是進(jìn)行安全性評價(jià)的主要依據。結合其他來(lái)源于計算毒理學(xué)、體外試驗或體內試驗的相關(guān)資料，有助于更加全面地解釋實(shí)驗結果，做出科學(xué)的評價(jià)。

9.6不確定系數

即安全系數。將動(dòng)物毒性試驗結果外推到人時(shí)，鑒于動(dòng)物與人的物種和個(gè)體之間的生物學(xué)差異，不確定系數通常為100，但可根據受試物的原料來(lái)源、理化性質(zhì)、毒性大小、代謝特點(diǎn)、蓄積性、接觸的人群范圍、保健食品及其原料中的使用量和人的可能攝入量、使用范圍及功能等因素來(lái)綜合確定其安全系數的大小。

9.7 毒物動(dòng)力學(xué)試驗的資料

毒物動(dòng)力學(xué)試驗是對化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行毒理學(xué)評價(jià)的一個(gè)重要方面，因為不同化學(xué)物質(zhì)及劑量大小，在毒物動(dòng)力學(xué)或代謝方面的物種差別往往對毒性作用影響很大。在毒性試驗中，原則上應盡量使用與人具有相同毒物動(dòng)力學(xué)或代謝模式的動(dòng)物品系來(lái)進(jìn)行試驗。研究受試物在實(shí)驗動(dòng)物和人體內吸收、分布、排泄和生物轉化方面的差別，對于將動(dòng)物試驗結果外推到人和降低不確定性具有重要意義。

10 保健食品安全性的重新評價(jià)

安全性評價(jià)的依據不僅僅是安全性毒理學(xué)試驗的結果，而且與當時(shí)的科學(xué)水平、技術(shù)條件以及社會(huì )經(jīng)濟、文化因素有關(guān)。因此，隨著(zhù)時(shí)間的推移，社會(huì )經(jīng)濟的發(fā)展、科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，當對原料或產(chǎn)品的安全性研究有新的科學(xué)認識時(shí)，應結合產(chǎn)品上市后人群食用過(guò)程中發(fā)現的安全問(wèn)題以及管理機構采取的與安全有關(guān)的管理措施，對產(chǎn)品的安全性進(jìn)行重新評價(jià)。